農(nóng)牧前沿報(bào)道，非洲豬瘟疫苗開發(fā)的一般流程和主要困難以及十一種在研非洲豬瘟疫苗的比較。
農(nóng)牧前沿報(bào)道，
非洲豬瘟疫苗開發(fā)的一般流程和主要困難
非洲豬瘟疫苗開發(fā)的一般流程如下（以減毒活疫苗的研發(fā)為例，圖片來源于網(wǎng)絡(luò)）：
非洲豬瘟疫苗開發(fā)主要困難（雷建林等2019）：
1、遺傳多樣性：目前，依據(jù) p72 基因 (B646L) 末端核苷酸的差異， 可將 ASFV 分為24 個(gè)基因型，基于病毒是否會(huì)引起紅細(xì)胞吸附的特性，已鑒定出至少有 8 個(gè)血清群。
2、免疫保護(hù)機(jī)制不清楚。
3、結(jié)構(gòu)復(fù)雜，基因組巨大為170-190kb，功能性蛋白超過兩百個(gè)。
4、可選擇的入侵方式：ASFV 可通過受體介導(dǎo)的內(nèi)吞作用或非特異性的巨胞飲作用入侵靶細(xì)胞。
5、免疫逃避：ASFV 主要靶向單核-巨噬細(xì)胞系統(tǒng)，通過抑制細(xì)胞凋亡、宿主免疫應(yīng)答等策略逃逸宿主免疫防御系統(tǒng)。
6、疫苗開發(fā)面臨的其它難題：基因缺失疫苗被認(rèn)為是短期內(nèi)最有希望開發(fā)成功的疫苗，具有同源保護(hù)作用，也能抵抗異源毒株的攻擊，但存在安全隱患，進(jìn)一步鑒定及敲除毒力基因后具有很大應(yīng)用前景然而，該類疫苗在商業(yè)化的進(jìn)程也面臨諸多挑戰(zhàn)：
1) 需建立區(qū)別疫苗免疫與野毒感染的 (Differentiating infected from vaccinated animals， DIVA) 診斷方法；
2) 需構(gòu)建病毒穩(wěn)定表達(dá)的細(xì)胞系，原代單核-巨噬細(xì)胞僅限于實(shí)驗(yàn)室對 ASFV 生物特性與免疫原性的研究，不適合用于疫苗批量生產(chǎn)，其它易感細(xì)胞傳代后病毒容易變異；
3) 需建設(shè)安全的病毒操作平臺， ASFV 致病性、攻毒模型、免疫效力評價(jià)需在動(dòng)物生物安全三級 (ABSL3) 以上實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行；
4) 安全性及免疫原性評價(jià)周期較長，基因缺失疫苗專利申請及獸藥證書的審批需要嚴(yán)格評估程序，確保毒株在宿主及環(huán)境中安全、遺傳穩(wěn)定，且免疫效力不受影響。
十一種在研非洲豬瘟疫苗的比較
01
類型：減毒活疫苗
構(gòu)建策略：MGF360-505R缺失和CD2v與MGF360-505R聯(lián)合缺失
基因型：Ⅱ，我國
毒株：Pig/CN/HLJ/2018
構(gòu)建單位：中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院哈爾濱獸醫(yī)研究所
效果：能提供對非洲豬瘟中國流行強(qiáng)毒株的100％免疫保護(hù)，可作為安全和有效的防控中國非洲豬瘟疫情的疫苗，具有極大的社會(huì)價(jià)值。
研究階段：截至8月，臨床中試
02
類型：減毒活疫苗
構(gòu)建策略：CD2v和 MGF 基因
基因型：Ⅱ，我國
毒株：SY18
構(gòu)建單位：軍事科學(xué)院軍事醫(yī)學(xué)研究院軍事獸醫(yī)研究所
效果：接種豬能夠100%抵抗親本毒株SY18株的攻擊
研究階段：安全有效評價(jià)
03
類型：亞單位疫苗
構(gòu)建策略：2018年分離的沈陽毒株CD2v蛋白出發(fā)，經(jīng)剪切優(yōu)化后，用CHO細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)了重組CD2v蛋白。
基因型：Ⅱ，我國
毒株：SY18
構(gòu)建單位：青島易邦生物工程有限公司
效果：本發(fā)明的表達(dá)非洲豬瘟CD2v蛋白細(xì)胞株，表達(dá)量高易于純化，可用于鑒別診斷，為生產(chǎn)非洲豬瘟亞單位疫苗和診斷試劑奠定了堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。
研究階段：構(gòu)建完成，具體不詳
04
類型：亞單位疫苗
構(gòu)建策略：在SF9細(xì)胞中表達(dá)非洲豬瘟CD2v蛋白的重組桿狀病毒
基因型：Ⅱ，我國
毒株：SY18
構(gòu)建單位：青島易邦生物工程有限公司
效果：本發(fā)明的表達(dá)非洲豬瘟CD2v蛋白細(xì)胞株，表達(dá)量高易于純化，可用于鑒別診斷，為生產(chǎn)非洲豬瘟亞單位疫苗和診斷試劑奠定了堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。
研究階段：構(gòu)建完成，具體不詳
05
類型：減毒活疫苗
構(gòu)建策略：通過不同的轉(zhuǎn)染質(zhì)粒構(gòu)建不同的缺失突變體p72DA224LGUS10T，p72DA238LGUS10T和p72DEP153RGAL10T在COS7細(xì)胞系，以及p72D276RRGAL10T在PAM細(xì)胞系。
基因型：I，西班牙
毒株：NH/P68
構(gòu)建單位：CSIC-UAM
效果：不同的缺失突變體對Arm07毒株有一定程度的保護(hù)作用，能夠減少臨床癥狀的程度
研究階段：安全有效評價(jià)
06
類型：減毒活疫苗
構(gòu)建策略：EP402R基因的單核苷酸缺失造成ORF移碼，提前產(chǎn)生終止密碼子
基因型：Ⅱ，西班牙
毒株：Lv17/WB/Rie1
構(gòu)建單位：馬德里動(dòng)物健康研究中心；馬德里康普頓斯大學(xué)
效果：口服使用，對野豬Arm07毒株的感染的預(yù)防保護(hù)力為92%
研究階段：安全有效評價(jià)
07
類型：減毒活疫苗
構(gòu)建策略：缺失特異性毒性相關(guān)的9GL(B119L)和UK(DP96R)基因
基因型：Ⅱ，美國
毒株：Georgia 2007
構(gòu)建單位：美國農(nóng)業(yè)部
效果：在體內(nèi)，甚至在相當(dāng)高的劑量下( 106HAD50 )對豬肌內(nèi)施用ASFV-GΔ9GL/ΔUK也不會(huì)誘導(dǎo)疾病。重要的是，在感染28天后使用毒性的親本毒株Georgia 2007攻擊時(shí)，使用104或106HAD500感染的動(dòng)物穩(wěn)定地受到保護(hù)而免于臨床疾病的表現(xiàn)。
研究階段：安全有效評價(jià)
08
類型：減毒活疫苗
構(gòu)建策略：缺失：多基因家族360基因9L，10L，11L，12L，13L和14L；和多基因家族505基因1R ，2R ，3R和4R。缺失DP148R基因
基因型：Ⅱ，英國
毒株：OURT88/3是來自葡萄牙的ASFV的非致病性分離株
構(gòu)建單位：皮爾布萊特研究所
效果：本發(fā)明人已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，與肌內(nèi)給藥相比，鼻內(nèi)施用減毒的ASF病毒在較低的劑量下是有效的。疫苗可以在初免-加強(qiáng)方案后施用。例如，在第一次接種后，受試者可以在一段時(shí)間(例如約7，14，21或28天)之后接受第二次加強(qiáng)施用。通常，加強(qiáng)施用的劑量高于初免施用的劑量。
研究階段：安全有效評價(jià)
09
類型：減毒活疫苗
構(gòu)建策略：不詳
基因型：Ⅱ，越南
毒株：不詳
構(gòu)建單位：越南國立農(nóng)業(yè)大學(xué)
效果：在實(shí)驗(yàn)室和越南北部的三個(gè)農(nóng)場使用效果良好
研究階段：安全有效評價(jià)
10
類型：核酸疫苗
構(gòu)建策略：將重組K205R-IRES-A104R-IRES-E183L基因連接至pMD19-T載體，將親本質(zhì)粒轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞，擴(kuò)增后提取質(zhì)粒即克隆質(zhì)粒，在克隆質(zhì)粒中提取目的片段；將目的片段進(jìn)行體外轉(zhuǎn)錄即得mRNA。
基因型：不詳，我國
毒株：不詳
構(gòu)建單位：四川農(nóng)業(yè)大學(xué)
效果：不詳
研究階段：完成了構(gòu)建，后續(xù)工作不詳
11
類型：重組腺病毒
構(gòu)建策略：非洲豬瘟EP153R與P54基因共表達(dá)的重組腺病毒載體構(gòu)建及腺病毒包裝
基因型：不詳，我國
毒株：不詳
構(gòu)建單位：揚(yáng)州大學(xué)
效果：不詳
研究階段：完成了構(gòu)建，后續(xù)工作不詳
以上都為從公開資訊獲得的材料，圖片來源于源文件，不包含其它在研但未公布的內(nèi)容。
對于是否使用商業(yè)化的疫苗目前在我國業(yè)界依然存在一定的爭議，同時(shí)對于臨床上流行的各種所謂的“疫苗”大家需要擦亮雙眼，避免上當(dāng)受騙遭受雙重?fù)p失，目前尚無任何一種非洲豬瘟疫苗商業(yè)化，即使到時(shí)有商業(yè)化的疫苗，對于不同的所謂的“疫苗”毒株，以及不同類型的野毒株之間都需要進(jìn)行鑒別診斷，選擇針對性的方法，避免不必要的損失。
本文轉(zhuǎn)載自李曼養(yǎng)豬大會(huì)陳芳洲，本文觀點(diǎn)不代表農(nóng)牧前沿立場。
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